VOIES DE FORMATION ET ROLE DE L' ACIDE PHOSPHATIQUE LORS DE L 'ACTIVATION MITOGENIQUE DES THYMOCYTES DE RAT

Samer M. AL BAWAB

L’étude que nous avons réalisée a porté sur les étapes de signalisation mises en jeu dans la phase précoce de l’activation lymphocytaire. Les données de notre groupe avaient suggéré que l’acide  phosphatidique (PA) formé très rapidement dans les cellules lymphoïdes en réponse aux mitogènes, pourrait activer la phosphodiestérase des nucléotides cycliques (PDE)-AMPc spécifique (PDE4).

Pour étayer cette hypothèse et mieux préciser ce rôle proposé du PA dans les tymocytes de rat, nous avons cherché, dans un premier temps à quantifier et à analyser par chromatographie en phase gazeuse les acides gras du PA formé pendant la stimulation mitogénique. Nous avons pu mettre en évidence une augmentation rapide de la masse du PA (5mn) ainsi qu’une augmentation de son contenu en acide arachidonique dans les cellules stimulées par la concanavaline A.

Dans un deuxième temps, nous avons essayé de déterminer par quelles voies et à partir de quels phospholipides le PA était formé. Pour cela nous avons fait des expériences de marquage radioactif classique et avons également analysé les espèces moléculaires de PA et de certains lipides potentiellement précurseurs de PA par HPLC en phase inverse, en utilisant une technique de détection fluorimétrique très sensible.

Ces études ont montré que le PA formé en réponse à l’activation mitogénique des thymocytes, dérive, via la phospholipase C, de deux compartiments  phospholipidiques, les phosphoinositides (65%) et les phosphatidylcholines (35%). Dans un dernier temps, nous avons essayé de craracteriser en système acellulaire l’activation de la PDE par le PA, en utilisant des isoformes recombinants de PDE4 et des PAs synthétiques contenant différents acides gras à degré d’insaturation variable en position sn2. Nous avons observé que l’espèce moléculaire 18:0/20:4 PA, formée pendant la stimulation mitogénique, est la plus efficace pour activer des isoformes recombinantes de PDE4, la PDE-4A5 et la PDE-4D3.